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多個(gè)研究領(lǐng)域依賴(lài)于稀有細胞的分離，例如從人血中分離循環(huán)腫瘤細胞 ( CTCs )、從母體樣本中分離胎兒細胞，或在分離低豐度的GFP陽(yáng)性轉染細胞。在這些情況下，傳統流式細胞分選儀的高系統壓力 ( >20psi ) 會(huì )對損害目標細胞的完整性和活性。高死體積會(huì )造成樣本損失，稀有細胞的數量本身就非常有限，這無(wú)疑是雪上加霜。此外，高度專(zhuān)業(yè)化的設備和技術(shù)人員，增加了操作的成本和復雜性。
單細胞柔性分選系統Pala基于微流控技術(shù)，流式細胞術(shù)和液滴分配技術(shù)。可在幾分鐘內將單個(gè)細胞分選并分離到96或384孔板中。低系統壓力 (<2psi ) 可確保輕柔分選，并保持細胞活力和完整性。為單細胞分選和分離提供了快速、簡(jiǎn)單的解決方案。
01. 實(shí)驗步驟
> 稀有細胞富集
將HEK-293細胞以0.002%的比例混入到無(wú)熒光SP2/0細胞中 ( 2.8μL HEK-293細胞加入到500uL SP2/0中) 制備模擬稀有細胞群。在此細胞群中，預計有10個(gè)FITC信號值大于100的HEK-293細胞。進(jìn)行富集時(shí)，利用FITC通道作為觸發(fā)器，觸發(fā)值為100。其它設門(mén)參數參照各組的分析數據。
96孔板A1孔預先加入150μL培養基進(jìn)行富集細胞收集。在富集過(guò)程中，將1μL的一滴液滴到載玻片上，在顯微鏡下檢測陽(yáng)性細胞的比例，發(fā)現一滴中總共含有10個(gè)細胞，其中一個(gè)呈GFP陽(yáng)性。將富集后A1孔中樣品 ( 少于200μL ) 轉移至新芯片中，用100μL培養基清洗兩遍A1孔，并將清洗液同樣轉移至新芯片中。
> 對富集后稀有細胞分離
利用單細胞分選模式分選單個(gè)熒光細胞，將前向散射光 ( FSC ) 通道作為激發(fā)器，激發(fā)水平為FSC50。為排除芯片之間的微小差別，將FITC下限設為90而不是之前的100，其它設門(mén)數據參照之前的設置。單個(gè)GFP陽(yáng)性細胞分布到預加150μL培養基的96孔板中。單個(gè)細胞利用顯微鏡進(jìn)行驗證，克隆培養14天。
02. 實(shí)驗結果
（1）模擬稀有細胞樣本包含500,000個(gè)SP2/0細胞和僅有10個(gè)GFP陽(yáng)性HEK-293細胞 ( 0.002% ）。富集后，目標群體在分離池中的頻率為10%，增加了5000倍。
（2）通過(guò)明場(chǎng)和熒光顯微鏡檢查，確認從富集中恢復了7個(gè)GFP陽(yáng)性HEK-293細胞，富集效率為70%。
（3）在單細胞分離后，96孔板中識別出7個(gè)中的4個(gè)GFP陽(yáng)性HEK-293細胞，單細胞分離效率為40%。14天的單細胞擴增確認了GFP陽(yáng)性細胞的克隆增殖。
03. 單細胞柔性分選系統Pala的優(yōu)勢
（1）溫和的操作條件：在低壓環(huán)境下操作 (＜2psi )，這有助于保護細胞的完整性和活性，避免因高壓造成的細胞損傷。
（2）靈活的分離模式：單細胞分離模式，富集分離模式，大量細胞分離模式，滿(mǎn)足不同應用需求。
（3）高效的分離速度：僅需1min即可完成將單細胞分離至96孔板中，6min可實(shí)現分離至384孔板。
（4）極低的死體積：近乎零的死體積，這有助于最大限度地減少樣本損失，特別是在處理稀有或珍貴的細胞樣本。
（5）適用于小樣本量：即使從很少的細胞開(kāi)始 ( 如100個(gè)細胞 )，單細胞分配器也能夠進(jìn)行有效的分離和分配。
總之，單細胞柔性分選系統Pala的兩步法實(shí)現稀有細胞分離，為傳統細胞分選儀器提供了一種經(jīng)濟高效的替代方案，這種低壓系統保留了分離細胞的完整性和活性，利于分離的克隆細胞健壯生長(cháng)。
* 本文轉載自「ProteinSimple」微信公眾號
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